發(fā)布時(shí)間: 2022-04-25 點(diǎn)擊次數(shù): 876次
梅里埃鑒定卡一般是提取純菌A的基因組DNA,然后PCR擴(kuò)增16srDNA片段,之后通過(guò)一代測(cè)序或三代測(cè)序檢測(cè)16SrDNA的全長(zhǎng),與國(guó)際上的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast比對(duì),默認(rèn)選取比對(duì)結(jié)果中相似性高的10位的物種分類(lèi)信息,之后構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),然后得出樣本A與XX物種的相似性高。
微生物實(shí)驗(yàn)室成功地進(jìn)行細(xì)菌菌種保存對(duì)于系統(tǒng)地分析流行菌株的生物學(xué)、分子生物學(xué)特征和耐藥性的變遷以及對(duì)醫(yī)院感染病原學(xué)調(diào)查、新藥臨床研究都十分重要。
把3種鑒定卡直接從-20℃移至35℃,待小孔液體*融化后,用注射器抽吸出陽(yáng)性生長(zhǎng)孔內(nèi)的液體,點(diǎn)種于血平板或沙保弱平板,置35℃孵箱內(nèi)24~48h,復(fù)蘇。復(fù)蘇菌落經(jīng)分離培養(yǎng)后對(duì)菌株進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn),以金黃色葡萄球菌,ATCC25923、大腸埃希菌,ATCC25922、綠膿假單胞菌,ATCC27853作質(zhì)控。
用鑒定卡和半固體菌種培養(yǎng)基同時(shí)保存12株臨床分離菌及3株,ATCC25922、ATCC25923、ATCC27853標(biāo)準(zhǔn)菌株6個(gè)月對(duì)照,其中半固體中的菌株定時(shí)轉(zhuǎn)種傳代。結(jié)果兩種方法保存菌株的生物學(xué)特性均一致。
菌株保存得不成功容易引起菌株的生物學(xué)特征改變,甚至是耐藥質(zhì)粒的丟失而改變細(xì)菌的耐藥譜,某些敏感菌株與抗生素結(jié)合位點(diǎn)發(fā)生突變而形成耐藥。
對(duì)生化卡內(nèi)的細(xì)菌反復(fù)凍融5次,分離出的細(xì)菌效果是相同的,證實(shí)保存在生化卡上的菌種可進(jìn)行多次復(fù)活利用,為了保證每次都能成功地復(fù)蘇獲得菌株,通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),生化卡上的試驗(yàn)小孔除陽(yáng)性控制小孔外,其它糖類(lèi)發(fā)酵孔內(nèi)的細(xì)菌均能復(fù)活成功,其結(jié)果無(wú)差異。